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上皮細(xì)胞培養(yǎng)

 

上皮細(xì)胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分,又由于癌起源于上皮組織,故上皮細(xì)胞培養(yǎng)特別受到重視。但上皮細(xì)胞培養(yǎng)中常混雜有成纖維細(xì)胞,培養(yǎng)時(shí)生長(zhǎng)速度往往超過(guò)上皮細(xì)胞,并難以純化,同時(shí)上皮細(xì)胞難以在體外長(zhǎng)期生存,因此純化和延長(zhǎng)生存時(shí)間是培養(yǎng)關(guān)鍵。

體內(nèi)上皮細(xì)胞生長(zhǎng)在膠原構(gòu)成的基膜,因此培養(yǎng)在有膠原的底物上可能利于生長(zhǎng),另外人或小鼠表皮細(xì)胞培養(yǎng)在以3T3細(xì)胞為飼養(yǎng)層(用射線(xiàn)照射后)時(shí),細(xì)胞易生長(zhǎng)并可發(fā)生一定程度的分化現(xiàn)象。降低PH、Ca2+含量和溫度,向培養(yǎng)基中加入表皮生長(zhǎng)因子,均有利于表皮細(xì)胞生長(zhǎng)。

以表皮細(xì)胞為例,用皮膚表皮和真皮分離培養(yǎng)法可獲得純上皮細(xì)胞,其法如下(黑木凳志夫 1981
1
、取材:外科植皮或手術(shù)殘余皮膚小塊,早產(chǎn)流產(chǎn)兒皮膚更好,取角化層薄者,切成0.51平方厘米小塊。
2
、置0.02%EDTA中,室溫,5分鐘。
3
、換入0.25%胰蛋白酶中,4過(guò)夜。
4
、分離:取出皮塊,用血管鉗或鑷子將表皮與真皮層分開(kāi)。
5
、取出表皮,剪成更小的塊后,置0.25%胰酶中,3730—60分鐘。
6
、反復(fù)吹打,制成懸液。
7
、培養(yǎng):用80目不銹鋼紗網(wǎng)濾過(guò)后,低速離心,吸去上清。
8
、直接加入培養(yǎng)基(Eagle20%小牛血清)制成細(xì)胞懸液,接種入培養(yǎng)瓶,CO2溫箱培養(yǎng)。

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