亚洲国产成人久久综合一区国产成人AV一区二区三区中文精品字幕网久久久久,亚洲人成网站18禁止久久影院,A真人一级无码毛片精品国产一区二区三区,91精品国产综合久久久久久一区黄网无码,91久久久无码国产精品免费不卡,国产欧美日本韩高清视频一区二区三区激情在线

熱門搜索:A549    293T 金黃色葡萄球菌 大腸桿菌 AKK菌
購物車 1 種商品 - 共0元
當(dāng)前位置: 首頁 > 行業(yè)資訊 > 細(xì)胞周期的測(cè)定

細(xì)胞周期的測(cè)定

 

一、原理:

細(xì)胞周期指細(xì)胞一個(gè)世代所經(jīng)歷的時(shí)間。從一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個(gè)周期。細(xì)胞周期反應(yīng)了細(xì)胞增殖速度。

單個(gè)細(xì)胞的周期測(cè)定可采用縮時(shí)攝影的方法,但它不能代表細(xì)胞群體的周期,故現(xiàn)多采用其他方法測(cè)群體周期。測(cè)定細(xì)胞周期的方法很多,有同位素標(biāo)記法、細(xì)胞計(jì)數(shù)法等,這里介紹一種利用BrdU滲入測(cè)定細(xì)胞周期的方法。

BrdU5-溴脫氧尿嘧啶核苷)加入培養(yǎng)基后,可做為細(xì)胞DNA復(fù)制的原料,經(jīng)過兩個(gè)細(xì)胞周期后,細(xì)胞中兩條單鏈均含BrdUDNA將占l/2,反映在染色體上應(yīng)表現(xiàn)為一條單體淺染。如經(jīng)歷了三個(gè)周期,則染色體中約一半為兩條單體均淺染,另一半為一深一淺。細(xì)胞如果僅經(jīng)歷了一個(gè)周期,則兩條單體均深染。計(jì)分裂相中各期比例,就可算出細(xì)胞周期的值。

二、儀器、用品與試劑

1、儀器、用品:同常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)
2
、試劑:BrdU1.0mg/ml),甲醇、冰醋酸,Giemsa染液,秋水仙素,2×SSC

三、操作步驟

1、細(xì)胞生長至指數(shù)期時(shí),向培養(yǎng)液中加入BrdU,使最終濃度為10μg/ml。
2
44小時(shí)加秋水仙素,使每ml中含0.1μg。
3
48小時(shí)后常規(guī)消化細(xì)胞至離心管中,注意培養(yǎng)上清的漂浮細(xì)胞也要收集到離心管中。
4
、常規(guī)染色體制片(見第三部分:染色體技術(shù))。
5
、染色體玻片置56水浴鍋蓋上,鋪上2×SSC 液,距紫外燈管6cm處紫外照射30分鐘。
6
、棄去2×SSC液,流水沖洗。
7
、Giemsa液染色10分鐘,流水沖洗,晾干。
8
、鏡檢100個(gè)分裂相,計(jì)第一、二、三、四細(xì)胞期分裂指數(shù)。
9
、計(jì)算:
細(xì)胞周期(Tc=48/{M1+2M2+3M3+4M4/100}(小時(shí))

卓尼县| 莱西市| 辽阳县| 英山县| 岑溪市| 健康| 时尚| 蒙阴县| 宁陵县| 延寿县| 台北县| 曲阜市| 新干县| 沙田区| 星子县| 加查县| 确山县| 和硕县| 台前县| 东乌| 孟村| 阳春市| 资兴市| 阜康市| 茶陵县| 孟津县| 汝州市| 澳门| 德昌县| 乐昌市| 和顺县| 平陆县| 叶城县| 酒泉市| 泸定县| 漳浦县| 永德县| 板桥市| 毕节市| 巩义市| 墨江|